Filamin 3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402897-ACT

O FLNB codifica a filamina 3, uma proteína de andaime que se liga à actina, entrecruza a F-actina e acopla o citoesqueleto a recetores de membrana e a complexos de sinalização. A filamina 3 ajuda a coordenar a forma celular, a adesão e a mecanotransdução ao organizar vias associadas ao envolvimento de integrinas, à dinâmica das adesões focais e à sinalização de GTPases da família Rho. Através destas funções, influencia a remodelação do citoesqueleto, a migração celular e a arquitetura dos tecidos durante o desenvolvimento e a homeostase. A atividade desregulada de FLNB ou alterações na organização da rede do citoesqueleto têm sido associadas a anomalias do desenvolvimento e a alterações, relevantes para a doença, na mecânica celular, sustentando o seu estudo em contextos de biologia musculoesquelética e do cancro.

Filamin 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FLNB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Filamin 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FLNB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FLNB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Filamin 3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FLNB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Filamin 3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Filamin 3 em células tumorais com expressão de FLNB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.