Filamin 2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402358

Descripción general

FLNC codifica la filamina 2, un gran andamiaje de unión a actina que entrecruza la F-actina y acopla el citoesqueleto a receptores de membrana y complejos de señalización. La filamina 2 coordina la mecanotransducción, la forma celular y la dinámica de adhesión al organizar redes de actina e interactuar con integrinas y la maquinaria asociada de adhesiones focales. En el músculo estriado, FLNC sostiene la integridad sarcomérica y miofibrilar y contribuye a la transmisión de fuerza y a las respuestas al estrés. La alteración genética de FLNC se asocia con cardiomiopatías y miopatías miofibrilares, lo que lo convierte en una diana relevante para estudiar la remodelación del citoesqueleto y los mecanismos de enfermedad muscular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Filamin 2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FLNC en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FLNC junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FLNC tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Filamin 2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FLNC para la investigación de la señalización de Filamin 2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FLNC críticos para la función de Filamin 2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FLNC para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Filamin 2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Filamin 2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FLNC. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Filamin 2 (h) y el plásmido HDR Filamin 2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FLNC para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FLNC definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.