Plásmido CRISPR de Activación (h) Filamin 2: sc-402358-ACT

El gen humano **FLNC** codifica **filamina 2**, un andamiaje citoesquelético de unión a actina que entrecruza la **F-actina** y conecta el citoesqueleto cortical con proteínas de membrana, coordinando la forma celular, la adhesión y la mecanotransducción. La filamina 2 participa en las adhesiones focales y en la señalización asociada a integrinas, influyendo en la remodelación del citoesqueleto, la migración y la transmisión de fuerzas en el músculo y otros tejidos sometidos a estrés mecánico. Las redes dependientes de FLNC se interconectan con vías que controlan la integridad del sarcómero y las respuestas al estrés, vinculando la organización citoesquelética con la homeostasis celular. La alteración genética o la expresión desregulada de **FLNC** se asocia con cardiomiopatías y miopatías esqueléticas, lo que respalda su relevancia para estudios de biología muscular y mecanismos de enfermedad.

Filamin 2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FLNC sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Filamin 2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FLNC en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FLNC, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Filamin 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FLNC y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Filamin 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Filamin 2 en células tumorales con expresión de FLNC silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.