Fibulin-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420294

Descripción general

Fbln1 codifica fibulina-1, una glicoproteína secretada de la matriz extracelular que se asocia con las membranas basales y las fibras elásticas para regular el ensamblaje de la matriz, la elasticidad tisular y la señalización célula–matriz. La fibulina-1 interactúa con componentes estructurales y adhesivos como la fibronectina, las lamininas y los proteoglucanos, influyendo en la dinámica de las adhesiones focales, la migración celular y la mecanotransducción. En modelos murinos, la alteración de la expresión de Fbln1 o de su incorporación a la matriz se ha vinculado con defectos en la organización vascular y del tejido conectivo, así como con procesos de remodelación relevantes para la fibrosis y los cambios estromales asociados a tumores. Estas funciones convierten a la fibulina-1 en un nodo útil para analizar la homeostasis de la matriz extracelular y el control microambiental de los fenotipos celulares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Fibulin-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Fbln1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Fbln1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Fbln1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Fibulin-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Fbln1 para la investigación de la señalización de Fibulin-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Fbln1 críticos para la función de Fibulin-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Fbln1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Fibulin-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Fibulin-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Fbln1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Fibulin-1 (m) y el plásmido HDR Fibulin-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Fbln1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Fbln1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.