Plásmido CRISPR de Activación (m) Fibronectin: sc-420394-ACT

Fn1 codifica la fibronectina, una glucoproteína de la matriz extracelular de alto peso molecular que coordina la adhesión y migración celulares, así como la organización del citoesqueleto, mediante su unión a integrinas y a múltiples componentes de la matriz. La señalización de la fibronectina se integra con la dinámica de las adhesiones focales, la remodelación de actina y la disponibilidad de factores de crecimiento, e influye en procesos como la reparación de heridas, la angiogénesis y las transiciones epitelio–mesénquima. En modelos murinos, la expresión alterada de Fn1 o el ensamblaje de la matriz se asocian con frecuencia a fibrosis tisular, interacciones tumor–estroma y remodelación inflamatoria, lo que la convierte en un nodo clave para estudiar la regulación de la matriz extracelular en microambientes relevantes para la enfermedad.

Fibronectin El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Fn1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Fibronectin El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Fn1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Fn1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Fibronectin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Fn1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Fibronectin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Fibronectin en células tumorales con expresión de Fn1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.