Plasmide CRISPR d'Activation (m) Fibromodulin: sc-420391-ACT

Le gène murin *Fmod* code la fibromoduline, un petit protéoglycane riche en leucines de la matrice extracellulaire qui se lie aux collagènes et module la fibrillogenèse, l’assemblage de la matrice et la biomécanique tissulaire. La fibromoduline influence la signalisation cellule–matrice et la disponibilité des facteurs de croissance, notamment via des interactions avec le TGF-β et des programmes de remodelage apparentés qui façonnent la fibrose, la réparation des plaies et l’organisation du stroma. Dans les tissus musculosquelettiques et conjonctifs, une expression altérée de *FMOD* est associée à des changements de l’intégrité des tendons/ligaments et de l’homéostasie du cartilage, et elle a été étudiée dans le contexte du remodelage dégénératif et du renouvellement de la MEC entraîné par l’inflammation. Ces propriétés font de *Fmod* une cible utile pour analyser les voies de la matrice extracellulaire, les états d’activation des fibroblastes et la régulation, dépendante de la matrice, de la migration et de la différenciation cellulaires dans des systèmes de modèles murins.

Fibromodulin Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Fmod sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Fibromodulin Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Fmod dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Fmod, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Fibromodulin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Fmod natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Fibromodulin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Fibromodulin dans les cellules tumorales présentant une expression de Fmod silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.