Particules Lentivirales d'Activation (h) fibrillin-1: sc-401449-LAC

FBN1 code la fibrilline‑1, une glycoprotéine majeure de la matrice extracellulaire qui s’assemble en microfibrilles et soutient l’architecture des fibres élastiques dans les tissus conjonctifs. La fibrilline‑1 contribue à la mécanique tissulaire et à l’organisation de la matrice, et elle module la signalisation en séquestrant des complexes latents de TGF‑β et en influençant des programmes transcriptionnels en aval dépendants des SMAD. Par ces rôles structurels et de signalisation, FBN1 affecte les interactions cellule–matrice, la mécanotransduction et le remodelage de la matrice extracellulaire. Les perturbations génétiques et fonctionnelles de FBN1 sont fortement associées à des phénotypes héréditaires du tissu conjonctif et à une dérégulation de l’activité de la voie TGF‑β, ce qui en fait une cible clé pour des études mécanistiques en biologie vasculaire, musculosquelettique et oculaire.

Les particules d'activation lentivirales fibrillin-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de FBN1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales fibrillin-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription FBN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de fibrillin-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif FBN1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.