Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
FHOD3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432529
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- FHOD3 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico FHOD3, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FHOD3 Anticuerpo (G-5): sc-374601
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
FHOD3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-432529 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Fhod3 codifica FHOD3, una formina relacionada con Diaphanous que nuclea y elongará filamentos lineales de actina, apoyando la remodelación del citoesqueleto de actina y la organización contráctil. En el músculo estriado de ratón, FHOD3 está enriquecida en estructuras sarcoméricas y contribuye al ensamblaje de las miofibrillas, la formación de fibras de estrés y el mantenimiento de la arquitectura celular mediante dinámicas de actina reguladas por GTPasas Rho. Estos procesos se intersectan con vías que controlan la mecanotransducción, la forma celular y la transmisión intracelular de fuerzas, lo que convierte a FHOD3 en un nodo útil para estudiar la homeostasis del citoesqueleto. La organización alterada de la actina y la integridad del sarcómero se asocian con fenotipos de miocardiopatía y disfunción muscular, situando a Fhod3 como un objetivo relevante para modelar in vitro mecanismos de enfermedad estructural del corazón y del músculo.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO FHOD3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Fhod3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Fhod3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Fhod3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FHOD3.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Fhod3 para la investigación de la señalización de FHOD3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Fhod3 críticos para la función de FHOD3
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Fhod3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido FHOD3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido FHOD3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Fhod3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FHOD3 (m) y el plásmido HDR FHOD3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Fhod3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Fhod3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.