Plásmido CRISPR de Activación (h) FGF-9: sc-403118-ACT

FGF9 codifica el factor de crecimiento de fibroblastos 9 (FGF-9), un mitógeno secretado con afinidad por la heparina que señaliza principalmente a través de los receptores FGFR para regular la proliferación celular, la supervivencia y la especificación de linaje durante el desarrollo y la homeostasis tisular. La actividad de FGF-9 se integra con cascadas de receptores tirosina quinasa, incluidas las vías MAPK/ERK, PI3K/AKT y PLCγ, influyendo en las interacciones epitelio‑mesénquima, las respuestas angiogénicas y la remodelación de la matriz extracelular. La expresión desregulada de FGF9 o una señalización aberrante de la vía FGFR se han relacionado con programas de desarrollo alterados y fenotipos oncogénicos en múltiples contextos tisulares, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de redes de factores de crecimiento. Como ligando endógeno dentro del eje más amplio FGF–FGFR, FGF-9 se examina con frecuencia por sus efectos sobre programas transcripcionales que gobiernan la diferenciación, la migración y la proliferación.

FGF-9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FGF9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FGF-9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FGF9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FGF9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FGF-9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FGF9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FGF-9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FGF-9 en células tumorales con expresión de FGF9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.