FGF-5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401993-ACT

FGF5 codifica o fator de crescimento de fibroblastos 5 (FGF-5), um ligante mitogênico secretado que sinaliza por meio de receptores FGFR com atividade tirosina-quinase para regular a proliferação celular, a diferenciação e a remodelação tecidual. A atividade de FGF-5 aciona cascatas canônicas de fatores de crescimento, incluindo MAPK/ERK e PI3K/AKT, influenciando interações epitélio–mesênquima e programas de desenvolvimento. Na biologia humana, alterações na expressão de FGF5 têm sido associadas à desregulação da sinalização de crescimento e são frequentemente estudadas em contextos como o ciclo da pele e dos folículos pilosos, a remodelação associada à cicatrização de feridas e a ativação de vias oncogênicas. Essas características tornam FGF5 um alvo útil para dissecar a dinâmica de sinalização mediada por FGFR e o controle transcricional de redes de fatores de crescimento.

FGF-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FGF5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FGF-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FGF5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FGF5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FGF-5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FGF5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FGF-5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FGF-5 em células tumorais com expressão de FGF5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.