Plásmido Doble Nickase (h) FGF-4: sc-403042-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)FGF-4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa FGF-4 (h) y el plásmido de doble nickasa FGF-4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FGF4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FGF-4 Anticuerpo (19805.11): sc-57126
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) FGF-4 | sc-403042-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) FGF-4 | sc-403042-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FGF4 codifica el factor de crecimiento de fibroblastos 4 (FGF-4), un ligando secretado de unión a heparina que señaliza principalmente a través de receptores tirosina quinasa de la familia FGFR para regular el patrón embrionario, el desarrollo de las extremidades y la morfogénesis tisular. La unión de FGF-4 activa las cascadas de señalización aguas abajo RAS–MAPK/ERK, PI3K–AKT y PLCγ, que coordinan la proliferación, la supervivencia, la migración y la diferenciación en los tipos celulares sensibles. La desregulación de la señalización de FGF4 se ha implicado en un control anómalo del crecimiento y en programas de desarrollo alterados, lo que la hace relevante para estudios sobre la activación de vías oncogénicas, el comportamiento de células madre/progenitoras y la comunicación tumor–estroma. Como parte del eje más amplio FGF–FGFR, FGF-4 se examina con frecuencia por sus efectos sobre la dinámica epitelio–mesénquima y la señalización del microambiente.
FGF-4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FGF4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FGF4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FGF4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FGF4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.