FGF-17 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405951

Panoramica

FGF17 codifica per il fattore di crescita dei fibroblasti 17 (FGF-17), un ligando secreto legante l’eparina che segnala principalmente attraverso le tirosin-chinasi recettoriali della famiglia FGFR per regolare proliferazione cellulare, sopravvivenza e specificazione di linea cellulare. L’attività di FGF-17 attiva le cascate canoniche degli RTK, tra cui RAS–MAPK/ERK e PI3K–AKT, influenzando la patterning tissutale e programmi mitogenici dipendenti dal contesto. Nella biologia umana, una deregolazione della segnalazione FGF/FGFR è spesso associata ad alterazioni dei percorsi di sviluppo e all’attivazione di vie oncogeniche, rendendo FGF17 un nodo utile per studiare la dinamica della segnalazione guidata dai fattori di crescita. L’indagine su FGF17 supporta la ricerca meccanicistica sulla comunicazione paracrina/autocrina, sulla disponibilità del ligando modulata dalla matrice extracellulare e sul cross-talk tra vie di segnalazione che può plasmare fenotipi rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FGF-17 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FGF17 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FGF17 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FGF17 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FGF-17.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FGF17 per lo studio della segnalazione di FGF-17, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FGF17 critici per la funzione di FGF-17
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FGF17 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FGF-17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FGF-17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FGF17. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FGF-17 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FGF-17 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FGF17 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FGF17 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.