fetuin-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401125

Übersicht

AHSG kodiert Fetuin‑A, ein sezerniertes Glykoprotein, das überwiegend von Hepatozyten produziert wird, im Plasma zirkuliert und mit Mineral- und Lipoproteinkomplexen assoziiert. Fetuin‑A moduliert die extrazelluläre Mineralhomöostase, indem es Calcium und Phosphat bindet, die Bildung von Calciproteinpartikeln beeinflusst und ektopische Verkalkung kontrolliert; außerdem interagiert es mit der TGF‑β/BMP‑Signalgebung und prägt so osteogene Differenzierungsprogramme. Als multifunktionelles Serumprotein wird Fetuin‑A häufig im Zusammenhang mit metabolischer Inflammation, der Regulation der Insulinsignalübertragung und Makrophagenantworten untersucht, wodurch die AHSG‑Biologie mit kardiometabolischen und verkalkungsbezogenen Phänotypen verknüpft ist. Eine veränderte AHSG‑Expression bzw. veränderte Fetuin‑A‑Spiegel wurden mit Änderungen der Leberfunktion und systemischen Prozessen in Verbindung gebracht, die für atherosklerotische Verkalkung, Mineralstoffentgleisungen bei chronischer Nierenerkrankung und Modelle des metabolischen Syndroms relevant sind.

Das fetuin-A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AHSG-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AHSG-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AHSG nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die fetuin-A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AHSG-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der fetuin-A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AHSG-Exone abzielen, die für die fetuin-A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AHSG-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom fetuin-A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom fetuin-A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AHSG-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das fetuin-A HDR-Plasmid (h) und fetuin-A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AHSG-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AHSG-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.