ferritin heavy chain CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418152

Übersicht

FTH1 kodiert die Ferritin-Schwerkette, eine katalytische Untereinheit des Ferritin-Komplexes, die Fe2+ zu Fe3+ oxidiert und eine sichere intrazelluläre Eisenspeicherung ermöglicht. Durch das Puffern von labilem Eisen und die Begrenzung der eisengetriebenen Bildung reaktiver Sauerstoffspezies trägt FTH1 zur Redoxhomöostase, zur mitochondrialen Funktion und zum Schutz vor oxidativen Schäden bei. Die Ferritin-Dynamik steht in Wechselwirkung mit Wegen der Eisenaufnahme und des Eisenexports, darunter transferrinrezeptorvermittelte Endozytose und der ferroportinabhängige Efflux, und prägt so zelluläre Antworten auf Hypoxie, Entzündung und metabolischen Stress. Eine fehlregulierte FTH1-Expression oder ein gestörter Ferritin-Stoffwechsel wird häufig in Zusammenhängen wie Eisenüberladung, Neurodegeneration, infektionsassoziierter Entzündung und Tumorbiologie untersucht, in denen die Eisenverfügbarkeit Proliferation und Zelltodprogramme beeinflusst.

Das ferritin heavy chain CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FTH1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FTH1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FTH1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ferritin heavy chain-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FTH1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ferritin heavy chain-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FTH1-Exone abzielen, die für die ferritin heavy chain-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FTH1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ferritin heavy chain CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ferritin heavy chain CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FTH1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ferritin heavy chain HDR-Plasmid (h) und ferritin heavy chain HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FTH1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FTH1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.