FBP2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404139-ACT

KHSRP kodiert das KH-Typ-Splicing-regulatorische Protein (FBP2), einen RNA-bindenden Faktor, der die posttranskriptionelle Genregulation koordiniert, indem er das Prä‑mRNA‑Splicing, die mRNA‑Stabilität, die Lokalisation und die Translation kontrolliert. FBP2 interagiert mit AU‑reichen Elementen sowie G‑reichen RNA‑Motiven und moduliert RNA‑Metabolismusprogramme, die die zelluläre Differenzierung, Stressantworten und die Outputs entzündlicher Signalwege prägen. Über seine Funktionen in der RNA‑Prozessierung und im RNA‑Turnover beeinflusst KHSRP Signalwege, die mit Proliferation und Apoptose verknüpft sind; eine veränderte KHSRP‑Aktivität wurde zudem mit fehlregulierten Genexpressionssignaturen in der Krebsbiologie, bei Immundysfunktionen und im Kontext neurologischer Erkrankungen in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen KHSRP zu einem nützlichen Ziel, um RNA‑Regulationsnetzwerke und ihren Einfluss auf Zellzustandsübergänge zu untersuchen.

FBP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KHSRP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FBP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KHSRP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KHSRP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FBP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KHSRP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FBP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FBP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KHSRP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.