Plásmido Doble Nickase (h) FBL7: sc-405043-NIC

FBXL7 (FBL7) codifica una proteína F-box que se predice que actúa como componente de reconocimiento de sustratos de los complejos ligasa E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), ayudando a dirigir proteínas seleccionadas hacia la ubiquitinación y su degradación por el proteasoma. A través de esta función, FBXL7 se vincula a mecanismos centrales de proteostasis que moldean la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y la transducción de señales al controlar la estabilidad de reguladores de vías. La alteración de componentes del sistema ubiquitina–proteasoma y de adaptadores F-box se asocia con frecuencia a un crecimiento desregulado y a umbrales apoptóticos modificados, lo que convierte a FBXL7 en un gen de interés en la biología mecanística del cáncer y en estudios de señalización relacionados. Se han descrito la expresión y alteraciones genómicas en FBXL7 en diversos conjuntos de datos tumorales, lo que respalda su relevancia para investigar cómo el control proteico mediado por ubiquitina influye en fenotipos celulares asociados a enfermedad.

FBL7 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FBXL7 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FBXL7. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FBXL7. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FBXL7 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.