Plásmido CRISPR de Activación (h) FBL19: sc-407318-ACT

FBXL19 (FBL19) codifica una proteína F-box que actúa como componente de reconocimiento de sustratos de los complejos ligasa E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), vinculando proteínas específicas a su degradación dependiente de ubiquitina. A través de una proteostasis regulada, FBXL19 contribuye al control de las transiciones de estado celular y de los programas transcripcionales, con funciones descritas en procesos asociados a la cromatina y en la regulación génica dependiente de señales. Como parte de las vías del sistema ubiquitina–proteasoma, una actividad alterada de FBXL19 puede perturbar la homeostasis proteica y las redes downstream que gobiernan la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. La desregulación de las ligasas de ubiquitina, incluidas las proteínas F-box, se asocia con frecuencia a la biología del cáncer y a fenotipos del desarrollo, lo que convierte a FBXL19 en un nodo relevante para estudios mecanísticos.

FBL19 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FBXL19 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FBL19 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FBXL19 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FBXL19, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FBL19. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FBXL19 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FBL19 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FBL19 en células tumorales con expresión de FBXL19 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.