Plásmido Doble Nickase (h) FBL10: sc-403232-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)FBL10 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa FBL10 (h) y el plásmido de doble nickasa FBL10 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KDM2B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FBL10 Anticuerpo (5G1): sc-293279
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) FBL10 | sc-403232-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) FBL10 | sc-403232-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El KDM2B humano codifica la proteína FBL10, una desmetilasa de histonas con dominio JmjC y un factor asociado a la cromatina que vincula el reconocimiento de islas CpG con la regulación transcripcional. FBL10 participa en el control epigenético de la expresión génica mediante la desmetilación de lisinas en histonas y la coordinación con mecanismos asociados a Polycomb, lo que influye en la accesibilidad de la cromatina y en programas génicos del desarrollo. Al modular vías implicadas en la progresión del ciclo celular, la diferenciación y el mantenimiento de la identidad celular, la actividad de KDM2B/FBL10 contribuye a configurar estados transcripcionales específicos de linaje. Se ha descrito desregulación de KDM2B en múltiples contextos relevantes para enfermedad, incluidos el reordenamiento transcripcional oncogénico y fenotipos alterados de tipo “stem”, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación epigenética.
FBL10 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KDM2B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KDM2B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KDM2B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KDM2B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.