FBL10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403232

Panoramica

KDM2B codifica la proteina umana FBL10, una demetilasi delle lisine istoniche con dominio JmjC che riconosce il DNA ricco di CpG tramite il suo dito di zinco CxxC e modula l’accessibilità della cromatina. FBL10 partecipa alla repressione trascrizionale associata a Polycomb e contribuisce a coordinare programmi epigenetici che controllano la progressione del ciclo cellulare, l’impegno di linea (lineage commitment) e il mantenimento dell’identità cellulare. Attraverso la regolazione degli stati di metilazione degli istoni e dell’attività di promotori/enhancer, KDM2B influenza vie che governano proliferazione e differenziamento. Un’attività di KDM2B deregolata e un targeting alterato della cromatina sono stati collegati a stati trascrizionali oncogeni e a fenotipi aberranti di tipo staminale in diversi contesti tumorali ed ematopoietici, rendendolo un locus utile per studi meccanicistici del controllo epigenetico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FBL10 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KDM2B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KDM2B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KDM2B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FBL10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KDM2B per lo studio della segnalazione di FBL10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KDM2B critici per la funzione di FBL10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KDM2B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FBL10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FBL10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KDM2B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FBL10 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FBL10 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KDM2B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KDM2B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.