Plásmido Doble Nickase (h) Fatty Acid Synthase: sc-400440-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Fatty Acid Synthase consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Fatty Acid Synthase (h) y el plásmido de doble nickasa Fatty Acid Synthase (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FASN. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Fatty Acid Synthase Anticuerpo (G-11): sc-48357
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Fatty Acid Synthase | sc-400440-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Fatty Acid Synthase | sc-400440-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **FASN** codifica la **sintasa de ácidos grasos**, un complejo enzimático citosólico multifuncional que cataliza la síntesis *de novo* de palmitato a partir de acetil-CoA y malonil-CoA utilizando NADPH. La actividad de FASN sostiene la homeostasis lipídica al aportar ácidos grasos para la biogénesis de membranas, la palmitoilación de proteínas y la señalización basada en lípidos, conectando el estado nutricional con programas de crecimiento anabólico. Interactúa con vías metabólicas centrales, incluido el transporte lanzadera citrato–malato–piruvato, la producción de NADPH y redes transcripcionales lipogénicas impulsadas por SREBP, y responde a la señalización de insulina y mTOR. La lipogénesis dependiente de FASN desregulada se estudia ampliamente en enfermedad metabólica, inflamación asociada a la obesidad, esteatosis hepática y estados proliferativos, donde un flujo lipídico alterado puede remodelar las respuestas celulares al estrés y el balance redox.
Fatty Acid Synthase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FASN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FASN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FASN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FASN alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.