FAST Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406169
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- FAST El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico FAST, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FAST Anticuerpo (B-9): sc-365125
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
FAST Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406169 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
FASTK (quinasa de serina/treonina activada por Fas) codifica una proteína mitocondrial de unión a ARN implicada en la regulación postranscripcional de la expresión génica mitocondrial, incluido el procesamiento y la estabilidad de determinados ARNmt necesarios para la fosforilación oxidativa. A través de sus funciones en la homeostasis mitocondrial, FASTK influye en la bioenergética celular, la adaptación al estrés y la señalización apoptótica vinculada a vías mediadas por Fas. La desregulación del metabolismo del ARN mitocondrial y de la capacidad de OXPHOS asociada a FASTK se ha estudiado en contextos de estrés metabólico, neurodegeneración y fenotipos de supervivencia de células cancerosas, donde la función mitocondrial es un determinante clave.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO FAST (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FASTK en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FASTK junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FASTK tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FAST.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FASTK para la investigación de la señalización de FAST, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de FASTK críticos para la función de FAST
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FASTK para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido FAST CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FAST CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FASTK. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FAST (h) y el plásmido HDR FAST (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FASTK para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FASTK definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.