Partículas Lentivirales de Activación (h) FAPα: sc-401511-LAC

La proteína alfa de activación de fibroblastos (FAPα; gen FAP) es una serinproteasa transmembrana de tipo II de la familia de las dipeptidil peptidasas, con actividad tanto de dipeptidil peptidasa como de endopeptidasa. Se encuentra característicamente enriquecida en fibroblastos activados y células estromales perivasculares, donde contribuye a la remodelación de la matriz extracelular, el recambio de colágeno y la regulación de la arquitectura tisular. Mediante el procesamiento proteolítico de sustratos de la matriz y de sustratos asociados a la señalización, FAPα influye en las interacciones estroma–sistema inmunitario, los programas de reparación de heridas y las vías de remodelación fibrótica. La expresión elevada de FAP se asocia con frecuencia al estroma tumoral desmoplásico, la inflamación crónica y microambientes vinculados a fibrosis, lo que la convierte en un objetivo relevante para estudiar la biología del estroma y la regulación del microambiente en modelos de enfermedad humana.

Las partículas de activación lentiviral FAPα (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de FAP en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FAPα (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción FAP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FAPα. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo FAP y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.