Partículas Lentivirales de Activación (h) FANCI: sc-402229-LAC

El gen humano **FANCI** codifica un componente central de la red de reparación del ADN de la anemia de Fanconi (FA), que protege la integridad del genoma durante la replicación del ADN. FANCI forma el complejo ID2 con FANCD2 y sufre fosforilación dependiente de ATR y monoubiquitinación mediada por el complejo núcleo de FA, lo que permite el reclutamiento de nucleasas downstream y de factores de recombinación homóloga para resolver los entrecruzamientos interhebra del ADN y las horquillas de replicación detenidas. A través de sus funciones en la protección de la horquilla de replicación, la señalización del punto de control de la fase S y la coordinación de la reparación, la disfunción de FANCI se asocia con inestabilidad cromosómica y con la patobiología de la anemia de Fanconi y síndromes relacionados de predisposición al cáncer. Como lectura en estudios mecanísticos, la actividad de FANCI puede monitorizarse mediante la monoubiquitinación de ID2, la formación de focos de RAD51 y la sensibilidad a agentes entrecruzantes.

Las partículas de activación lentiviral FANCI (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de FANCI en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FANCI (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción FANCI, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FANCI. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo FANCI y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.