Plásmido Doble Nickase (h) FANCI: sc-402229-NIC

FANCI codifica un componente central de la vía de reparación del ADN de la anemia de Fanconi (FA), que protege la estabilidad del genoma durante la replicación del ADN. Ante estrés replicativo o daño por enlaces cruzados interhebra, FANCI forma un heterodímero con FANCD2 y se monoubiquitina para favorecer el reclutamiento de factores de reparación posteriores implicados en el procesamiento nucleolítico coordinado, la síntesis por translesión y la recombinación homóloga. Mediante estas funciones, FANCI contribuye a la protección de las horquillas de replicación detenidas, a la señalización del punto de control de la fase S y a la supresión de aberraciones cromosómicas. La alteración de genes de la vía FA, incluido FANCI, se asocia con la anemia de Fanconi y con defectos de reparación del ADN relevantes en cáncer, lo que convierte a FANCI en un nodo útil para estudiar mecanismos de inestabilidad genómica.

FANCI El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FANCI en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FANCI. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FANCI. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FANCI alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.