FANCF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406909

Panoramica

FANCF codifica una componente centrale della via di riparazione del DNA dell’anemia di Fanconi (FA), che contribuisce all’assemblaggio e alla stabilizzazione del complesso core FA responsabile della monoubiquitinazione di FANCD2 e FANCI. Questa modificazione coordina la riparazione dei legami crociati interfilamento del DNA e favorisce la protezione delle forcelle di replicazione tramite interazioni con la ricombinazione omologa e la segnalazione dei checkpoint. La funzione di FANCF sostiene la stabilità del genoma durante la fase S e la perdita o deregolazione dell’attività della via FA è associata a instabilità cromosomica e a risposte alterate allo stress replicativo. Difetti genetici nei geni FA, incluso FANCF, sono associati alla biologia dell’anemia di Fanconi e sono ampiamente studiati nel contesto dei meccanismi di tolleranza al danno del DNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FANCF (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FANCF in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FANCF insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FANCF a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FANCF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FANCF per lo studio della segnalazione di FANCF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FANCF critici per la funzione di FANCF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FANCF per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FANCF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FANCF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FANCF. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FANCF Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FANCF (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FANCF per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FANCF definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.