Partículas Lentivirales de Activación (h) FANCD2: sc-400445-LAC

FANCD2 codifica un efector central de la vía de reparación de enlaces cruzados interhebra (ICL) del ADN en la anemia de Fanconi (AF) y coordina el mantenimiento del genoma durante la fase S. Ante el estrés replicativo o el daño por enlaces cruzados, FANCD2 se monoubiquitina y se acumula en las horquillas detenidas, donde actúa como andamiaje de la reparación junto con socios como FANCI, BRCA1/2, RAD51 y nucleasas que procesan las lesiones del ADN. Esta actividad se conecta con la recombinación homóloga, la señalización de puntos de control y la protección de la horquilla de replicación, vinculando la función de FANCD2 con la estabilidad cromosómica y la progresión del ciclo celular. Los defectos en la reparación mediada por FANCD2 se asocian con fenotipos de anemia de Fanconi y una mayor sensibilidad a agentes entrecruzantes, lo que convierte a esta vía en un foco clave en estudios de respuestas al daño del ADN e inestabilidad genómica asociada al cáncer.

Las partículas de activación lentiviral FANCD2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de FANCD2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FANCD2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción FANCD2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FANCD2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo FANCD2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.