Plásmido Doble Nickase (h2) FAM35A: sc-416298-NIC-2
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h2)FAM35A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa FAM35A (h2) y el plásmido de doble nickasa FAM35A (h22) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FAM35A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h2) FAM35A | sc-416298-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El FAM35A humano codifica una proteína nuclear implicada en el mantenimiento del genoma, ya que modula la elección de la vía de reparación de roturas de doble cadena del ADN e influye en la resección de los extremos en los sitios de daño. Se ha relacionado con el control de la recombinación homóloga y con la interacción funcional con redes de reparación asociadas a BRCA1/BRCA2, lo que afecta las respuestas celulares al estrés replicativo y a agresiones genotóxicas. La actividad o expresión alteradas de FAM35A se asocian con fenotipos de inestabilidad genómica y se han observado en contextos relevantes para la biología del cáncer y estados con deficiencias en la reparación del ADN. Los reactivos dirigidos a FAM35A facilitan estudios mecanísticos de la señalización del daño en el ADN, cribados de perturbación basados en CRISPR y el perfilado de dependencias de las vías de reparación mediante ensayos de formación de focos de RAD51, marcadores de resección de extremos y dinámica de las horquillas de replicación.
FAM35A El plásmido de doble nicasa (h2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FAM35A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FAM35A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FAM35A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FAM35A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.