Plásmido CRISPR de Activación (h) FAM26F: sc-405728-ACT

FAM26F codifica una pequeña proteína transmembrana implicada en la biología de las células inmunitarias y en respuestas asociadas al interferón, con una expresión enriquecida en linajes hematopoyéticos e inducible ante señales inflamatorias. Los vínculos funcionales descritos sitúan a FAM26F en procesos que modulan la activación de leucocitos, la comunicación célula–célula y los resultados de señalización inmunitaria que se solapan con vías impulsadas por citocinas. Se han observado cambios en la expresión de FAM26F en contextos de enfermedades relacionadas con el sistema inmune y en microambientes tumorales-inmunes, lo que respalda su uso como marcador y como nodo mecanístico en estudios de inmunorregulación. En consecuencia, FAM26F resulta de interés para dilucidar cómo los programas estimulados por interferón y la señalización asociada a membrana contribuyen a fenotipos inmunitarios y a estados transcripcionales asociados a enfermedad.

FAM26F El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FAM26F sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FAM26F El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FAM26F en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FAM26F, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FAM26F. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FAM26F y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FAM26F en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FAM26F en células tumorales con expresión de FAM26F silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.