Particules Lentivirales d'Activation (h) FAM198B: sc-409269-LAC

FAM198B code une protéine sécrétée ou luminale impliquée dans la régulation de la communication cellule–matrice et du remodelage tissulaire, avec des liens rapportés avec la différenciation épithéliale et la signalisation du microenvironnement. Des études transcriptomiques et fonctionnelles ont associé FAM198B à des processus tels que l’adhérence cellulaire, la migration et l’organisation de la matrice extracellulaire, suggérant un rôle dans des voies qui façonnent la polarité cellulaire et les interactions intercellulaires. Une expression altérée de FAM198B a été observée dans de multiples contextes tumoraux et états du développement, ce qui étaye son utilité comme marqueur moléculaire dans des études portant sur l’invasion, les interactions avec le stroma et la régulation génique spécifique de lignée. Ces caractéristiques font de FAM198B une cible pertinente pour des investigations mécanistiques en biologie du cancer, dans la signalisation liée à la fibrose et dans les transitions d’état cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales FAM198B (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de FAM198B dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FAM198B (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription FAM198B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FAM198B. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif FAM198B ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.