Plásmido CRISPR de Activación (h2) FAM186A: sc-414163-ACT-2

El gen humano FAM186A codifica una proteína poco caracterizada, implicada —según datos de expresión y de asociación genética— en programas reguladores específicos de tipo celular y en la homeostasis tisular. Aunque su función molecular precisa sigue sin resolverse, FAM186A se estudia comúnmente en el contexto de redes de señalización intracelular y de control transcripcional que influyen en la diferenciación celular y en las respuestas adaptativas al estrés. Se han descrito variantes o una expresión desregulada de FAM186A en conjuntos de datos vinculados a rasgos de enfermedades complejas, lo que impulsa la investigación de su contribución a mecanismos patogénicos mediante genómica funcional. La edición génica de FAM186A permite estudios de pérdida y ganancia de función, el mapeo de vías y el perfilado fenotípico en modelos celulares humanos para aclarar efectos posteriores sobre procesos celulares y firmas moleculares relevantes para la enfermedad.

FAM186A El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FAM186A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FAM186A El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FAM186A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FAM186A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FAM186A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FAM186A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FAM186A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FAM186A en células tumorales con expresión de FAM186A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.