Plásmido CRISPR de Activación (h2) FAM177A1: sc-417161-ACT-2

La FAM177A1 humana (familia con similitud de secuencia 177, miembro A1) codifica una proteína poco caracterizada con vínculos emergentes con la homeostasis celular y la biología relacionada con el sistema inmunitario, según datos de expresión y de asociaciones genéticas. La evidencia actual sugiere que FAM177A1 podría influir en el tráfico intracelular y en programas de señalización que moldean las respuestas inflamatorias, lo que la hace relevante para estudiar la regulación dependiente del contexto de las vías de la inmunidad innata. Se han reportado variantes o cambios en la expresión de FAM177A1 asociados a fenotipos complejos de enfermedad, lo que respalda su uso como diana en genómica funcional para explorar interacciones gen‑ambiente y redes transcripcionales aguas abajo. La edición génica de FAM177A1 en células humanas permite estudios mecanísticos de conectividad de vías, cribado fenotípico y validación de elementos reguladores candidatos que afectan a procesos inmunitarios y de respuesta al estrés.

FAM177A1 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FAM177A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FAM177A1 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FAM177A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FAM177A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FAM177A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FAM177A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FAM177A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FAM177A1 en células tumorales con expresión de FAM177A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.