FAM123A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404231

Descripción general

AMER2 (FAM123A) es una proteína citoplasmática implicada en la regulación de la señalización Wnt/β-catenina y de procesos asociados a la polaridad celular, al vincular señales próximas a la membrana con programas transcripcionales posteriores que influyen en la proliferación y la diferenciación. Al modular componentes de la red reguladora de β-catenina, FAM123A puede afectar la adhesión y la organización del citoesqueleto, con un impacto potencial en la arquitectura de los tejidos epiteliales. La alteración de la actividad de la vía Wnt es ampliamente relevante para la biología del desarrollo y la transformación oncogénica, lo que convierte a AMER2 en un punto de entrada útil para analizar dependencias del estado de señalización. La investigación sobre AMER2/FAM123A sustenta estudios mecanísticos del diálogo entre vías, de resultados transcripcionales específicos del contexto y de relaciones genotipo–fenotipo en modelos celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FAM123A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AMER2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AMER2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AMER2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FAM123A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AMER2 para la investigación de la señalización de FAM123A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de AMER2 críticos para la función de FAM123A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AMER2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FAM123A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FAM123A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AMER2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FAM123A (h) y el plásmido HDR FAM123A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AMER2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AMER2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.