Plásmido Doble Nickase (h) FADS1: sc-404735-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)FADS1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa FADS1 (h) y el plásmido de doble nickasa FADS1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FADS1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FADS1 Anticuerpo (7-RY13): sc-134337
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) FADS1 | sc-404735-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) FADS1 | sc-404735-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FADS1 codifica la desaturasa de ácidos grasos 1, una Δ5-desaturasa que cataliza un paso clave y limitante de la velocidad en la biosíntesis de ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga, al convertir el ácido dihomo-γ-linolénico en ácido araquidónico y otros sustratos relacionados en precursores posteriores de eicosanoides. Mediante la regulación de la composición lipídica de las membranas y de la disponibilidad de mediadores lipídicos, FADS1 influye en la señalización inflamatoria, la homeostasis metabólica y procesos de señalización celular vinculados a la remodelación de fosfolípidos y al metabolismo del ácido araquidónico. La variación genética y la expresión alterada de FADS1 se han asociado con cambios en los perfiles lipídicos circulantes y con la susceptibilidad a rasgos complejos que implican fenotipos cardiometabólicos e inflamatorios, lo que la convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de programas celulares impulsados por lípidos. En modelos celulares humanos, la perturbación de FADS1 permite investigar el flujo metabólico, la dinámica de membrana y respuestas transcripcionales dependientes de mediadores lipídicos.
FADS1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FADS1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FADS1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FADS1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FADS1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.