Plásmido Doble Nickase (h) Factor XIII A: sc-402690-NIC

F13A1 codifica la subunidad A del factor XIII de la coagulación, una transglutaminasa que cataliza el entrecruzamiento covalente de la fibrina para estabilizar los coágulos y regular la fibrinólisis tras la activación por trombina. El factor XIII A participa en la fase terminal de la cascada de coagulación y contribuye a la remodelación de la matriz extracelular y a la reparación de heridas al entrecruzar la fibrina y otros sustratos proteicos. La alteración o disrupción de la actividad de F13A1 se asocia con una estabilidad anómala del coágulo y fenotipos hemorrágicos, y el entrecruzamiento desregulado se ha estudiado en contextos trombóticos e inflamatorios. Como enzima citosólica enriquecida en células mieloides que se integra funcionalmente en redes de fibrina, el factor XIII A también es relevante para estudios sobre interacciones plaqueta–leucocito y mecanismos de reparación tisular.

Factor XIII A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus F13A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de F13A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de F13A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con F13A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.