Plásmido CRISPR de Activación (h) Factor IX: sc-402469-ACT

El F9 humano codifica el Factor IX de la coagulación, un cimógeno de serinproteasa dependiente de la vitamina K producido principalmente en los hepatocitos y secretado al plasma como un componente clave de la cascada de coagulación intrínseca. Tras su activación a Factor IXa, se ensambla con el Factor VIIIa sobre superficies fosfolipídicas para formar el complejo tenasa intrínseco, catalizando la activación del Factor X y propagando la generación de trombina. La actividad de F9 se regula mediante la γ-carboxilación postraduccional y la unión a membranas dependiente de calcio, que integran las vías biosintéticas hepáticas con la señalización hemostática. Las alteraciones genéticas o funcionales de F9 se asocian fuertemente con trastornos de la coagulación, lo que lo convierte en un locus ampliamente utilizado para estudiar la regulación génica hepática, la maduración de proteasas secretadas y el control de la coagulación a nivel de vía.

Factor IX El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de F9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Factor IX El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus F9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional F9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Factor IX. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo F9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Factor IX en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Factor IX en células tumorales con expresión de F9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.