F-Spondin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433292

Descripción general

Spon1 codifica la F-spondina, una glicoproteína asociada a la matriz extracelular que actúa como señal de guía axonal y de adhesión neuronal durante el desarrollo y la remodelación del sistema nervioso central. La F-spondina interactúa con receptores de la superficie celular y con proteoglicanos para modular el crecimiento de neuritas, la migración celular y la organización sináptica, y se la vincula comúnmente con la señalización de la matriz extracelular y con procesos de remodelación de la matriz dependientes de proteasas. En tejidos de ratón, la expresión de SPON1 se ha utilizado para investigar vías subyacentes al patrón neurodesarrollativo y a la plasticidad asociada a lesiones, así como cambios microambientales vasculares e inflamatorios. Las alteraciones en la biología de SPON1/F-spondina se han explorado en el contexto de fenotipos neurológicos y relevantes para la neurodegeneración, donde la señalización dependiente de la matriz extracelular puede moldear la conectividad neuronal y la homeostasis tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO F-Spondin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Spon1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Spon1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Spon1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína F-Spondin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Spon1 para la investigación de la señalización de F-Spondin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Spon1 críticos para la función de F-Spondin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Spon1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido F-Spondin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido F-Spondin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Spon1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR F-Spondin (m) y el plásmido HDR F-Spondin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Spon1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Spon1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.