Plásmido Doble Nickase (h) EYA3: sc-406221-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)EYA3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa EYA3 (h) y el plásmido de doble nickasa EYA3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EYA3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EYA3 Anticuerpo (G-9): sc-515626
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) EYA3 | sc-406221-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) EYA3 | sc-406221-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EYA3 (homólogo 3 de “eyes absent”) codifica un coactivador transcripcional y una fosfatasa de la familia de las haloácido deshalogenasas que integra la señalización con programas de expresión génica durante el desarrollo y la homeostasis tisular. EYA3 participa en redes que controlan decisiones sobre el destino celular, la migración y las respuestas al daño del ADN, en parte mediante interacciones con factores de transcripción de la familia SIX y la modulación de la señalización dependiente de fosforilación. Su actividad de fosfatasa de tirosina se ha vinculado a la regulación de la dinámica del citoesqueleto y de vías adaptativas al estrés que influyen en la proliferación y la supervivencia. La expresión o actividad alteradas de EYA3 se han asociado con fenotipos oncogénicos y con procesos vasculares e inmunitarios desregulados, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos en biología de la enfermedad.
EYA3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EYA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EYA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EYA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EYA3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.