Plásmido Doble Nickase (h) EY-cadherin: sc-401988-NIC

CDH18 codifica la EY-cadherina humana, un receptor de adhesión célula–célula dependiente de calcio de la superfamilia de las cadherinas, que contribuye a la arquitectura tisular y a la señalización mediada por contacto. A través de la adhesión homofílica y su acoplamiento a las cateninas y al citoesqueleto de actina, la EY-cadherina influye en la organización de las uniones adherentes, la polaridad celular y la remodelación del citoesqueleto. Los patrones alterados de expresión de cadherinas pueden perturbar los programas de adhesión epiteliales y asociados al tejido neural, afectando la migración celular y los estados de diferenciación. La desregulación de la adhesión mediada por cadherinas se ha asociado con fenotipos invasivos y una señalización del desarrollo aberrante en múltiples contextos patológicos, lo que respalda a CDH18 como una diana para estudios mecanísticos de la biología de las uniones.

EY-cadherin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDH18 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDH18. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDH18. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDH18 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.