Plásmido Doble Nickase (h) EXT1: sc-404635-NIC

EXT1 codifica la exostosina-1, una glicosiltransferasa residente del aparato de Golgi que forma un complejo hetero-oligomérico con EXT2 para catalizar la polimerización de cadenas de heparán sulfato sobre las proteínas centrales de los proteoglicanos. Al controlar la biosíntesis de heparán sulfato, EXT1 configura la organización de la matriz extracelular y modula la distribución y la señalización de ligandos que se unen a heparina, influyendo en vías como FGF, WNT, Hedgehog y BMP. La alteración de la función de EXT1 perturba los patrones de sulfatación de los proteoglicanos y las interacciones ligando–receptor que regulan el desarrollo, la morfogénesis y la comunicación célula–matriz. Las alteraciones germinales y somáticas en EXT1 se asocian con crecimiento esquelético anómalo y fenotipos relacionados con tumores, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la glicobiología y los comportamientos celulares dependientes de la señalización.

EXT1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EXT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EXT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EXT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EXT1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.