Plásmido CRISPR de Activación (h) Exportin 4: sc-404233-ACT

XPO4 codifica la exportina 4, un receptor de exportación nuclear de la familia de las carioferinas-β que media el transporte, dependiente de RanGTP, de cargas proteicas seleccionadas desde el núcleo hacia el citoplasma. Al controlar la localización subcelular de proteínas reguladoras, la exportina 4 contribuye al tráfico núcleo–citoplasma, al control transcripcional y a programas más amplios de proteostasis. El transporte núcleo‑citoplasmático desregulado es una característica recurrente en la biología del cáncer y en otros estados proliferativos o asociados al estrés, lo que convierte a XPO4 en un nodo útil para estudiar cómo la dinámica del transporte reconfigura las salidas de señalización. La interrogación funcional de XPO4 respalda estudios mecanísticos del diálogo cruzado (cross-talk) entre el tráfico, la regulación del ciclo celular y las respuestas al estrés.

Exportin 4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de XPO4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Exportin 4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus XPO4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional XPO4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Exportin 4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo XPO4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Exportin 4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Exportin 4 en células tumorales con expresión de XPO4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.