EXOSC4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405751

Descripción general

EXOSC4 codifica un componente central del complejo exosoma de ARN, una exorribonucleasa multisubunidad 3′–5′ que regula la vigilancia y el recambio del ARN en el núcleo y el citoplasma. Al favorecer el procesamiento y la degradación de diversas especies de ARN, incluidos ARNr, sn/snoARN y transcritos aberrantes o inestables, EXOSC4 contribuye al control de calidad del ARN, la biogénesis ribosomal y el mantenimiento de la homeostasis del transcriptoma. La función del exosoma se interrelaciona con el procesamiento co-transcripcional del ARN, la exportación nuclear y las vías de degradación del ARN que modelan los programas de expresión génica. La desregulación de factores asociados al exosoma se ha vinculado con alteraciones del metabolismo del ARN y respuestas al estrés celular, lo que convierte a EXOSC4 en un nodo relevante para estudios mecanísticos de defectos en el procesamiento de ARN en contextos relacionados con enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EXOSC4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen EXOSC4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del EXOSC4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de EXOSC4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EXOSC4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en EXOSC4 para la investigación de la señalización de EXOSC4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de EXOSC4 críticos para la función de EXOSC4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de EXOSC4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EXOSC4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido EXOSC4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus EXOSC4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EXOSC4 (h) y el plásmido HDR EXOSC4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología EXOSC4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana EXOSC4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.