Plasmide Double Nickase (m) Exo70: sc-424708-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Exo70 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Exo70 Double Nickase (m) et le plasmide Exo70 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Exoc7. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Exo70 Antibody (D-6): sc-365825
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Exo70 | sc-424708-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Exo70 | sc-424708-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Exoc7 code pour Exo70, une sous-unité centrale du complexe exocyste octamérique, qui arrime les vésicules de sécrétion à des sites spécifiques de la membrane plasmique afin de permettre une exocytose polarisée. Dans les cellules de souris, Exo70 soutient les événements de trafic membranaire nécessaires à la polarité épithéliale, à la croissance des neurites, à la cytokinèse et à la migration cellulaire dirigée, en coordonnant l’amarrage des vésicules avec le remodelage du cytosquelette d’actine et les voies de signalisation des petites GTPases. Le trafic dépendant de l’exocyste influence le recyclage des récepteurs et l’acheminement à la surface de molécules d’adhérence, reliant ainsi la fonction d’Exo70 à des voies qui régulent la forme cellulaire, l’invasion et la morphogenèse tissulaire. Une dérégulation des composants de l’exocyste a été associée à une motilité cellulaire aberrante et à des anomalies du développement, faisant d’Exoc7 une cible utile pour des études mécanistiques des phénotypes induits par le trafic.
Exo70 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Exoc7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Exoc7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Exoc7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Exoc7.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.