Plasmide CRISPR/Cas9 KO Evi-1 (h): sc-404112

Présentation

MECOM code le facteur de transcription Evi-1, une protéine à doigts de zinc se liant à l’ADN, qui régule des programmes d’expression génique contrôlant le maintien des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques, l’engagement de lignée et la différenciation cellulaire. Evi-1 participe à des réseaux transcriptionnels et épigénétiques qui s’articulent avec la signalisation TGF-β/SMAD, les voies PI3K–AKT et le remodelage de la chromatine, afin de moduler la prolifération et la survie. Une activité dérégulée de MECOM/Evi-1 est fréquemment associée aux hémopathies malignes, où une altération du contrôle transcriptionnel contribue à une auto-renouvellement aberrant et à une différenciation déficiente. Au-delà du développement sanguin, MECOM a également été impliqué dans des processus du développement et dans des circuits transcriptionnels oncogéniques liés à la transformation et à des phénotypes métastatiques dans divers contextes tissulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Evi-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MECOM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MECOM, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MECOM à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Evi-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MECOM pour l'étude de la signalisation de Evi-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MECOM essentiels à la fonction de Evi-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MECOM pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Evi-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Evi-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MECOM. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Evi-1 plasmide HDR (h) et le Evi-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MECOM pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MECOM définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.