Plásmido Doble Nickase (h) ETBR: sc-401804-NIC

EDNRB codifica el receptor de endotelina tipo B (ETBR), un receptor acoplado a proteína G que se une a péptidos de endotelina para regular el flujo intracelular de calcio, la señalización de la fosfolipasa C y las vías posteriores asociadas a MAPK/ERK y PI3K. La actividad de ETBR contribuye a la migración y diferenciación de las células de la cresta neural, al desarrollo de los melanocitos y al control del tono vascular mediante redes de señalización dependientes de endotelina. En biología humana, la disfunción de EDNRB se asocia con trastornos del desarrollo del sistema nervioso entérico, como la enfermedad de Hirschsprung, y con fenotipos de pigmentación, lo que refleja su papel en el patrón de desarrollo y en programas de motilidad celular. La señalización alterada de EDNRB también se estudia en el contexto de las interacciones entre células tumorales y microambiente y de la plasticidad de linaje, por lo que resulta relevante para estudios mecanísticos de la señalización mediada por GPCR y de vías del desarrollo.

ETBR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EDNRB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EDNRB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EDNRB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EDNRB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.