Estrogen Receptor alpha Double Nickase Plasmid (h): sc-400011-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Estrogen Receptor alpha Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Estrogen Receptor alpha Double-Nickase-Plasmid (h) und Estrogen Receptor alpha Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ESR1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Estrogen Receptor alpha: sc-8002
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Estrogen Receptor alpha Double Nickase Plasmid (h) | sc-400011-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Estrogen Receptor alpha Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400011-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ESR1 kodiert den Östrogenrezeptor alpha (ERα), einen ligandaktivierten nukleären Rezeptor, der als Transkriptionsfaktor wirkt und östrogenresponsive Genprogramme koordiniert. Nach Hormonbindung bindet ERα an Östrogen-Response-Elemente und rekrutiert Coregulator-Komplexe, um die Chromatinzugänglichkeit und die Transkription zu modulieren; dabei integriert er Signale aus PI3K/AKT-, MAPK/ERK- und zellzyklusregulatorischen Netzwerken. Die ERα-Aktivität prägt in zahlreichen Geweben Zellproliferation, Differenzierung und die metabolische Homöostase, und eine veränderte ESR1-Regulation oder Variantenformen werden häufig im Kontext hormonresponsiver Tumorbiologie sowie endokriner Signalfehlregulation untersucht. Da ERα-abhängige Transkription mit epigenetischer Kontrolle und Rezeptor-Crosstalk verknüpft ist, stellt ESR1 ein zentrales Ziel dar, um Steroidrezeptor-Signalwege und die Architektur transkriptioneller Netzwerke zu analysieren.
Estrogen Receptor alpha Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ESR1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ESR1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ESR1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ESR1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.