Plásmido Doble Nickase (h) Estrogen Receptor alpha: sc-400011-NIC

ESR1 codifica el receptor de estrógenos alfa (ERα), un receptor nuclear activado por ligando que actúa como factor de transcripción coordinando programas génicos sensibles a los estrógenos. Tras la unión de la hormona, ERα se une a elementos de respuesta a estrógenos y a complejos de corre reguladores para modular la accesibilidad de la cromatina y la transcripción, integrando señales a través de las redes PI3K/AKT, MAPK/ERK y de regulación del ciclo celular. La actividad de ERα influye en la proliferación celular, la diferenciación y la homeostasis metabólica en múltiples tejidos, y la regulación alterada de ESR1 o sus variantes se estudian con frecuencia en la biología tumoral sensible a hormonas y en la desregulación de la señalización endocrina. Dado que la transcripción dependiente de ERα se cruza con el control epigenético y el crosstalk entre receptores, ESR1 es una diana central para analizar la señalización de receptores esteroideos y la arquitectura de las redes transcripcionales.

Estrogen Receptor alpha El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ESR1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ESR1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ESR1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ESR1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.