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Estrogen Receptor alphaCRISPR激活质粒(m) | sc-418925-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
Estrogen Receptor alphaCRISPR激活质粒(m2) | sc-418925-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
小鼠 Esr1 基因编码雌激素受体α(ERα),这是一种由配体激活的核受体,可作为转录因子协调雌激素依赖的基因表达程序。在激素结合后,ERα 会结合雌激素反应元件并招募共调控复合物,从而调控染色质可及性与转录;同时还与 MAPK/ERK、PI3K/AKT 及生长因子信号通路发生串话。ERα 的活性影响细胞周期进程、分化、代谢以及免疫相关的转录状态,使 Esr1 成为内分泌调控中的关键节点。ERα 信号的失调也被广泛用作分子研究框架,用于探究哺乳动物系统中激素应答表型以及与疾病相关的转录重编程。
Estrogen Receptor alpha CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Esr1的表达。
Estrogen Receptor alpha CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Esr1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Esr1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Estrogen Receptor alpha表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Esr1位点,并能够研究内源性位点上依赖于Estrogen Receptor alpha的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Esr1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Estrogen Receptor alpha通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。