Plásmido CRISPR de Activación (h) Erythropoietin/EPO: sc-400283-ACT

EPO codifica la eritropoyetina, una hormona glicoproteica secretada que regula la supervivencia, proliferación y diferenciación de los progenitores eritroides principalmente mediante la unión a EPOR y la señalización posterior JAK2/STAT5, con aportes adicionales de las vías PI3K/AKT y MAPK. Su expresión está estrictamente controlada por mecanismos de detección de oxígeno, en particular por la regulación transcripcional dependiente de HIF, que acopla el estrés hipóxico a la eritropoyesis. La desregulación de la señalización EPO/EPOR y los programas de respuesta al oxígeno alterados son relevantes para la biología de la anemia, la policitemia y las adaptaciones asociadas a la hipoxia tumoral, y se estudian con frecuencia en sistemas modelo hematopoyéticos, renales y de cáncer. EPO también se utiliza como lectura de la actividad de la vía de hipoxia y como marcador de cambios en el estado celular que afectan la secreción endocrina de citocinas.

Erythropoietin/EPO El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EPO sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Erythropoietin/EPO El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EPO en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EPO, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Erythropoietin/EPO. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EPO y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Erythropoietin/EPO en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Erythropoietin/EPO en células tumorales con expresión de EPO silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.