ERRγ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416300

Panoramica

ESRRG codifica per il recettore correlato agli estrogeni gamma (ERRγ), un recettore nucleare orfano che agisce come fattore di trascrizione indipendente dal ligando, regolando la biogenesi mitocondriale, la fosforilazione ossidativa e l’omeostasi energetica cellulare. ERRγ coopera con i coattivatori PGC-1 per controllare programmi genici coinvolti nell’ossidazione degli acidi grassi, nell’attività del ciclo del TCA e nell’assemblaggio della catena respiratoria, collegando il controllo trascrizionale all’adattamento metabolico. Partecipa inoltre a programmi di differenziamento specifici di tessuto, anche in contesti cardiaci e neuronali, e modula reti di segnalazione endocrine e sensibili allo stress. Un’attività disregolata di ESRRG/ERRγ è stata associata a rimodellamento metabolico e a stati bioenergetici alterati osservati in molteplici modelli rilevanti per la malattia, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico in studi di biologia dei sistemi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ERRγ (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ESRRG in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ESRRG insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ESRRG a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ERRγ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ESRRG per lo studio della segnalazione di ERRγ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ESRRG critici per la funzione di ERRγ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ESRRG per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ERRγ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ERRγ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ESRRG. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ERRγ Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ERRγ (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ESRRG per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ESRRG definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.