Plasmide CRISPR/Cas9 KO ERRβ (m): sc-424021

Présentation

Le récepteur bêta apparenté aux œstrogènes (ERRβ), codé chez la souris par Esrrb, est un récepteur nucléaire orphelin qui agit comme facteur de transcription en coordonnant des programmes géniques impliqués dans le métabolisme énergétique, la fonction mitochondriale et les décisions de destinée cellulaire. Dans les cellules pluripotentes, Esrrb contribue au maintien de l’auto-renouvellement et s’articule avec les réseaux transcriptionnels centraux qui régulent la différenciation et l’engagement de lignée. L’activité d’ERRβ est liée à la signalisation des récepteurs des hormones stéroïdiennes et, plus largement, au contrôle transcriptionnel des voies oxydatives et du développement. Une dérégulation de la transcription dépendante d’Esrrb a été associée à des issues développementales altérées ainsi qu’à des changements dépendants du contexte de la prolifération cellulaire et de l’état métabolique, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans des modèles pertinents pour l’étude des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ERRβ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Esrrb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Esrrb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Esrrb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ERRβ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Esrrb pour l'étude de la signalisation de ERRβ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Esrrb essentiels à la fonction de ERRβ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Esrrb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ERRβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ERRβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Esrrb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ERRβ plasmide HDR (m) et le ERRβ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Esrrb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Esrrb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.