Plasmide CRISPR/Cas9 KO ERp72 (h2): sc-402689-KO-2

Présentation

PDIA4 code ERp72, une isomérase des disulfures protéiques du réticulum endoplasmique (RE) qui catalyse les échanges thiol–disulfure afin de favoriser le repliement oxydatif des protéines et le contrôle qualité. ERp72 participe à la dégradation associée au RE (ERAD) et à la réponse aux protéines mal repliées (UPR), contribuant à maintenir la protéostasie durant la maturation des protéines sécrétées et en situation de stress cellulaire. Par son rôle dans la régulation rédox et ses fonctions de type chaperon, PDIA4 est liée à des voies impliquant la signalisation du stress oxydatif et le traitement des antigènes dans les cellules sécrétoires professionnelles. La dérégulation de la protéostasie du RE et de l’activité de PDIA4 a été associée à des états inflammatoires et à la biologie tumorale, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’adaptation au stress et de l’homéostasie protéique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ERp72 (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PDIA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PDIA4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PDIA4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ERp72.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PDIA4 pour l'étude de la signalisation de ERp72, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PDIA4 essentiels à la fonction de ERp72
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PDIA4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ERp72 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ERp72 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PDIA4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ERp72 plasmide HDR (h) et le ERp72 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PDIA4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PDIA4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.